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PCR、qPCR與dPCR技術(shù)對比

更新時間:2025-09-22    點擊次數(shù):93

  PCR、qPCR與dPCR技術(shù)對比

  PCR(聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng))、qPCR(熒光定量PCR)和dPCR(數(shù)字PCR)是分子診斷中常用的核酸擴(kuò)增技術(shù),三者核心差異在于檢測原理、定量能力及應(yīng)用場景。

  1. 原理與檢測方式?

  普通PCR?:

  通過變性、退火、延伸循環(huán)擴(kuò)增目標(biāo)DNA,終點通過電泳定性分析產(chǎn)物?。

  僅能判斷目標(biāo)序列“有無",無法定量?。

  qPCR(熒光定量PCR)?:

  在PCR體系中加入熒光染料或探針,實時監(jiān)測擴(kuò)增過程,通過Ct值(閾值循環(huán)數(shù))定量初始模板量?。

  可區(qū)分絕對定量(需標(biāo)準(zhǔn)曲線)和相對定量(如基因表達(dá)分析)?。

  dPCR(數(shù)字PCR)?:

  將樣本分割為微滴或微孔,獨(dú)立擴(kuò)增后統(tǒng)計陽性/陰性比例,直接計算絕對拷貝數(shù),無需標(biāo)準(zhǔn)曲線?。

  2. 定量能力與靈敏度?

  技術(shù) 定量范圍 靈敏度 適用場景

  PCR 定性/半定量 低(依賴電泳) 基因克隆、病原體初篩?

  qPCR 相對/絕對定量 高(Ct值) 基因表達(dá)、病原體定量?

  dPCR 絕對定量 高(單分子) 稀有突變檢測、低豐度樣本?

  3. 優(yōu)缺點對比?

  PCR?:

  優(yōu)點:成本低、操作簡單。

  缺點:無法定量,易污染(需開蓋檢測)?。

  qPCR?:

  優(yōu)點:實時監(jiān)測、自動化高、靈敏度好?。

  缺點:依賴標(biāo)準(zhǔn)曲線,擴(kuò)增效率影響準(zhǔn)確性?。

  dPCR?:

  優(yōu)點:無需標(biāo)準(zhǔn)曲線,抗抑制劑能力強(qiáng)?。

  缺點:設(shè)備昂貴,通量較低。

  4. 應(yīng)用場景選擇建議?

  定性檢測?(如病原體篩查):普通PCR?。

  基因表達(dá)分析?:qPCR(相對定量)?。

  絕對定量需求?(如腫瘤基因突變):dPCR?。

  總結(jié)?:qPCR是PCR的升級版,實現(xiàn)定量分析;dPCR進(jìn)一步突破定量精度限制,但成本更高。選擇時需權(quán)衡檢測需求與預(yù)算?。

  注:僅供科研使用,以上資料供參考,如需具體產(chǎn)品說明請咨詢技術(shù)老師或品牌供應(yīng)商。

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